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本期目录

2016 4卷 1期 刊出日期2016-01-20
标准与规范
论著

施东婧, 杜洪印, 喻文立, 吴莉, 盛明薇, 翁亦齐, 王永旺, 刘文娜, 王树森

2016, (1): 18-22.

目的 研究饱和氢气生理盐水对大鼠原位肝移植缺血 / 再灌注损伤(IRI)中肝细胞自噬的调节作用。方法 选取体重为 220 ~ 250 g 的健康雄性 SD 大鼠 24 只,采用随机数字表法将其分为 3 组(n 8):假手术组(Sham 组)、原位肝移植组(OLT 组)、饱和氢气生理盐水处理组(HS 组)。Sham 组仅进行开关腹操作。OLT 组和 HS 组建立原位肝移植模型。HS 组在肝下下腔开放即刻经肝下下腔静脉注射 6 ml/kg 含饱和氢气的生理盐水,OLT 组则注射等量生理盐水。再灌注 6 h S 组术毕 6 h 时取材,测定血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,观察肝组织形态学改变,检测氧化应激水平,应用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测微管相关蛋白轻链 3(LC3- Ⅱ)和自噬相关因子 Beclin-1 蛋白表达,应用 RT-PCR 检测基因天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3(caspase-3)和细胞色素 C(Cyt-c)的 mRNA 表达水平。结果 Sham 组相比,OLT 组和 HS 组肝功能和病理损伤明显(P 0.05),MDA 水平升高超氧化物歧化酶(SOD)活性降低显著〔MDA(nmol/mg):1.25±0.13、1.02±0.11 比 0.64±0.07,SOD(U/mg):135.78±10.92、158.81±12.09 比 204.13±17.75,均 P < 0.05〕,凋亡及自噬水平均升高(caspase:2.02±0.26、1.67±0.17 比 1.09±0.18,Cyt-c:1.96±0.19、1.64±0.18 比 0.99±0.17,均 P < 0.05)。HS 组与 OLT 组相比,各项指标均下降〔MDA(nmol/mg):1.02±0.11 比 1.25±0.13,caspase-3(2-ΔΔCt):1.67±0.17 比 2.02±0.26,Cyt-c(2-ΔΔCt):1.64±0.18 比 1.96±0.19,均 P < 0.05〕。结论 饱和氢气生理盐水可通过抑制自噬,减少细胞凋亡,有效缓解肝移植中 IRI。

康颖, 贾保祥, 刘杰, 徐秀红

2016, (1): 23-26.

目的 研究肾移植术后抗人类白细胞抗原(HLA)- Ⅱ类抗体阳性患者与移植肾功能和长期存活。方法 2007 年在首都医科大学附属北京友谊医院已检测出抗 HLA- Ⅱ类抗体阳性的肾移植术后107 例患者,于 2010 年和 2011 年再次检测其抗 HLA- Ⅱ类抗体,并在 2014 年 10 月前后进行肾功能和长期存活观察。结果 2007 年检测出 107 例肾移植术后抗 HLA- Ⅱ类抗体阳性患者,其中 19 例患者肾功能正常,2010-2011 年检测仍阳性,2014 年检测肾功能正常。43 例患者肾功能正常,2010-2011 年检测抗HLA- Ⅱ类抗体转阴性,2014 年肾功能正常。2 例患者肾功能正常,2010-2011 年查抗体转阴性,肾功能正常,2014 年肾功能下降。3 例患者肾功能正常,2010-2011 年查抗体转阴性,肾功能下降,2014 年肾功能无再次下降趋势。18 例患者肾功能正常,2010-2011 年查抗 HLA- Ⅱ类抗体阳性,大部分患者肾功能下降,2014 年时肾功能全部下降。22 例患者肾功能正常,2 ~ 3 年后移植肾失功或失联。结论 HLA- Ⅱ类抗体对移植肾功能的影响因人而异,也可能存在保护性抗体。

于瑶, 何金丹, 王振, 李世朋, 喻文立, 杜洪印

2016, (1): 27-31.

目的 探讨牡荆素(Vitexin)对小鼠肝缺血 / 再灌注损伤(HIRI)的作用并阐述可能的机制。方法 选取 18 只体重为 20 ~ 25 g 的健康雄性 C57BL/6 小鼠,随机分为假手术组(Sham 组)、缺血 / 再灌注组(I/R 组)和牡荆素组(Vitexin 组),每组 6 只小鼠。Vitexin 组于术前 6 h 腹腔注射 10 mg/kg 牡荆素。Sham 与 I/R 组腹腔注射等量生理盐水。I/R 组和 Vitexin 组建立小鼠肝脏 HIRI 模型,Sham 组仅进行开腹和关腹操作。检测各组小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,光镜下观察肝组织病理学改变,TUNEL 法检测肝细胞凋亡情况 ;通过蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测自噬调控因子 Beclin1、抗凋亡相关基因 Bcl-2、微管相关蛋白轻链 3(LC3)与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3(caspase-3)的表达水平。结果 与 I/R 组相比较,Vitexin 组小鼠血清 ALT 和 AST 水平明显降低〔ALT(U/L):201.57±77.12比 444.31±92.61,AST(U/L):311.72±90.91 比 623.54±112.05,均 P < 0.05〕,且在光镜下可见肝细胞损伤减轻 ;同时凋亡的肝细胞数量明显减少 ;肝组织中 Beclin1、LC3 和 caspase-3 蛋白的表达水平明显降低,而 Bcl-2 蛋白的表达水平明显增加。结论 牡荆素能够减轻小鼠 HIRI,其机制可能与牡荆素抑制再灌注时肝细胞自噬有关。

吴莉, 施东婧, 李津源, 杜洪印, 喻文立, 翁亦齐

2016, (1): 32-36.

目的 探讨饱和氢气生理盐水对大鼠肝脏冷缺血 / 再灌注损伤(IRI)的保护作用及其机制。方法 清洁级雄性 SD 大鼠 24 只,周龄为 8 ~ 10 周,体重 220 ~ 250 g,采用随机数字表法分为 3 组(n 8):假手术组(Sham 组)行开关腹操作,并游离相应血管 ;肝脏冷缺血 / 再灌注组(I/R 组)于门静脉阻断前 5 min 经下腔静脉缓慢注射生理盐水(6 ml/kg);饱和氢气生理盐水处理组(HS 组)于门静脉阻断前 5 min 经下腔静脉缓慢注射饱和氢气生理盐水(6 ml/kg)。I/R 组与 HS 组阻断全肝血流后,于肝下下腔静脉开口 1 mm 作为灌注液流出道,用 4℃乳酸林格液经门静脉灌注肝脏。再灌注后 6 h 后经下腔静脉抽取血样,测定血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)含量,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)和白细胞介素 -10(IL-10)浓度,采用硫代巴比妥酸法测定肝组织丙二醛(MDA)含量,采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,苏木精 - 伊红(HE)染色,于光镜下观察肝组织病理学表现,荧光定量 PCR 检测天冬氨特异性半胱氨酸蛋白酶 3(caspase-3)、Bcl-2 和 Bax mRNA 的表达情况。结果 Sham 组相比,I/R 组和 HS 组血清中 ALT、AST、TNF-α 浓度及肝 组 织 MDA 量、caspase-3 和 Bax/Bcl-2 的 mRNA 高,I/R IL-10 浓 度 降 低,HS 组IL-10 含 量 升 高, 肝 组 织 SOD 低〔ALT(U/L):467.3±203.6、275.7±74.0 比 73.9±30.1,AST(U/L):929.6±442.7、581.4±143.3 比 194.6±72.2,TNF-α(μg/L):0.081 3±0.0298、0.052 0±0.009 9 比 0.027 3±0.004 4,MDA(nmol/mg):1.13±0.10、1.00±0.11 比 0.84±0.06,caspase-3(2-ΔΔCt):2.77±0.98、1.46±0.33 比 1.00±0.00,Bax/Bcl-2(2-ΔΔCt):1.59±0.34、1.12±0.16 比 1.02±0.10,IL-10(μg/L):0.141 5±0.023 3、0.320 6±0.064 8 比 0.205 3±0.049 7,SOD(U/mg):194.9±20.4、218.1±16.0 比240.8±16.9, 均 P < 0.05〕。 与 I/R 组 相 比,HS 组 血 清 ALT、AST、TNF-α 浓 度 及 肝 组 织 MDA 含 量、caspase-3 和 Bax/Bcl-2 的 mRNA 水平均降低,血清 IL-10 浓度及肝组织 SOD 活性升高〔ALT(U/L):275.7±74.0 比 467.3±203.6,AST(U/L):581.4±143.3 比 929.6±442.7,TNF-α(μg/L):0.052 0±0.009 9 比 0.081 3±0.029 8,MDA(nmol/mg):1.00±0.11 比 1.13±0.10,caspase-3(2-ΔΔCt):1.46±0.33 比 2.77±0.98,Bax/Bcl-2(2-ΔΔCt):1.12±0.16 比 1.59±0.34,IL-10(μg/L):0.320 6±0.064 8 比 0.141 5±0.023 3,SOD (U/mg):218.1±16.0 比 194.9±20.4,均 P < 0.05〕。结论 饱和氢气生理盐水可通过其选择性抗氧化、抑制炎症反应及抗凋亡特性减轻大鼠肝脏冷 IRI。

王振, 李世朋, 张建军

2016, (1): 37-39.

目的 研究肝移植术后新发消化系统恶性肿瘤患者的临床特点、诊治经过、预防措施及预后。方法 回顾性分析 2006 年 1 月至 2013 年 1 月在天津市第一中心医院行肝移植术并接受完整随访的 1 809 例中 8 例新发消化系统恶性肿瘤患者的临床资料。总结患者的烟酒史、原发病、血药浓度、新发消化系统恶性肿瘤类型、诊治经过及预后等临床资料。结果 肝移植术后新发消化系统恶性肿瘤的发生率为 0.44%8/1 809),其中结肠癌 3 例,胃癌 2 例,肝癌 2 例,食管癌 1 例。在患者确诊新发消化系统恶性肿瘤后, 减少他克莫司(FK506)用药量,并根据病情接受相应的治疗手段。8 例患者的随访时间为 3 ~ 62 个月,中位时间为 18.5 个月,病死率为 50%,均死于肿瘤进展和多器官功能衰竭。结论 免疫抑制剂、烟酒史及年龄可能是肝移植术后新发消化系统恶性肿瘤发生的高危因素。在保证移植肝功能正常和有效预防感染的前提下,尽可能减少免疫制剂用量,是预防肝移植术后新发消化系统恶性肿瘤发生的最重要措施。

牛剑祥

2016, (1): 40-45.

目的 分析射频消融联合无水乙醇局部注射对原发性肝癌患者生命质量及预后的影响。方法 对内蒙古医科大学附属医院 2011 年 1 月至 2014 年 12 月射频消融联合无水乙醇局部注射治疗的 204 例原发性肝癌患者临床资料进行分析,采用随机数字表法分为对照组 104 例和治疗组 100 例。对照组给予超声引导下经皮无水乙醇注射治疗,治疗组给予射频消融联合无水乙醇局部注射治疗,治疗观察周期均为3 个月。观察两组治疗前后患者肝功能、甲胎蛋白(AFP)的变化 ;使用欧洲癌症研究与治疗组织生命质量测定量表(EORTC QLQ-C30)评价患者生命质量的改变 ;观察复发率及生存期,采用 Logistic 回归分析预后的危险因素。结果 治疗前,与治疗组患者相比,对照组丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶 AST)、总胆红素、清蛋白、AFP 水平比较,差异均无统计学意义(P 0.05);治疗后,治疗组患者 ALT、AST、总胆红素、清蛋白、AFP 水平比对照组显著降低,差异均有统计学意义〔ALT(U/L):30.16±18.55 比 39.56±20.48,AST(U/L):32.25±19.48 比 40.44±21.56,总胆红素(μmol/L):5.40±2.57 比 9.54±3.25,清 蛋 白(g/L):42.54±6.89 比 40.24±6.87,AFP(μg/L):154±82 比 223±107, 均 P 0.05〕。 治疗前,对照组与治疗组患者生命质量无显著差异(P 0.05);治疗后,治疗组患者总体健康情况、躯体功能、社会功能评分较对照组升高,恶心和呕吐、疼痛、疲倦、失眠、腹泻、食欲减退评分显著降低,差异均有统计学意义〔健康情况(分):71.63±10.65 比 65.24±11.21,躯体功能(分):89.04±8.60 比 85.26±8.53,社会功能(分):72.88±13.22 比 65.59±13.06,恶心和呕吐(分):16.33±14.33 比 27.36±19.22,疼痛(分):17.28±11.77 比 25.32±10.07,疲倦(分):17.67±11.20 比 28.87±12.05,失眠(分):14.38±14.57比 28.50±20.36,腹泻(分):4.98±8.24 比 15.98±20.05,食欲减退(分):13.55±15.25 比 29.77±20.21,均 P 0.05〕。本研究共随访了 190 例患者,随访率为 93.14%,健在的患者有 108 例,死亡的患者有 82 例。多因素 Logistic 回归分析结果显示,发病位置、治疗前 ALT、AFP 水平、术中输血、手术方式、肿瘤复发与射频消融联合无水乙醇局部注射治疗原发性肝癌后预后相关(P 0.05)。结论 射频消融联合无水乙醇局部注射是一种有效治疗原发性肝癌的方法,原发性肝癌预后与发病位置、治疗前 ALT、AFP 水平、术中输血、手术方式、肿瘤复发相关。

秦科, 邝晓聪, 孙煦勇, 董建辉, 蓝柳根, 黄莹, 曹嵩, 李美思, 李壮江, 李海滨, 苏庆东, 周洁惠

2016, (1): 46-51.

目的 探讨免疫抑制状态下重症肺部感染小鼠肺巨噬细胞亚型变化情况,观察乌司他丁(UTI 干预的巨噬细胞调控效应,初步明确其拮抗重症肺部炎症的作用机制。方法 选取 60 只 Balb/c 小鼠,分为对照组、模型组和乌司他丁组,每组 20 只小鼠 ;其中模型组采用腹腔注射甲泼尼龙(30 mg/kg),气管内滴注内毒素(10 mg/kg)制备免疫低下急性重症肺部感染小鼠模型 ;乌司他丁组则在建模前后腹腔注射乌司他丁(1×105 U/kg)干预 ;主要观察小鼠呼吸情况、肺泡灌洗液炎性细胞构成、肺组织病理改变与评分以及 M1 和 M2 巨噬细胞等指标,采用免疫组化法检测肺组织 M2 巨噬细胞的 CD163 表达,采用实时定量 PCR检测肺泡灌洗液细胞中 M1 巨噬细胞分泌分子肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)、白细胞介素 -6(IL-6)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和 M2 巨噬细胞标志与分泌分子 CD206、Arg-1、IL-10 的 mRNA 表达水平。结果 模型组和乌司他丁组小鼠一般情况较差,部分小鼠出现呼吸窘迫现象,其中模型组小鼠肺泡腔与间质炎性细胞浸润,肺间质增宽,乌司他丁组病变减轻,与模型组相比,肺损伤评分显著降低〔(肺损伤评分(分):6.77±0.85 比 8.21±0.92,P 0.05〕,乌司他丁组与模型组肺泡灌洗液中中性粒细胞比例显著增高,但两组差异不大。除 iNOS 外,M1 和 M2 巨噬细胞相关分子均高于对照组,与模型组相比,乌司他丁组 M1 巨噬细胞相关分子 TNF-α、IL-6 以及 M2 巨噬细胞相关分子 IL-10、CD206 均显著降低〔TNF2-ΔΔCt):0.42±0.18 比 0.76±0.12,IL-6(2-ΔΔCt):0.72±0.26 比 1.22±0.32,IL-10(2-ΔΔCt):3.91±1.35 比 6.84±2.13,CD206(2-ΔΔCt):0.61±0.91 比 0.92±0.31,均 P < 0.05〕,而 iNOS 和 Arg-1 则与模型组无显著差别。此外,免疫组化染色检测乌司他丁组肺组织 M2 巨噬细胞的 CD163 表达,其结果明显低于模型组〔CD163(A)值 :31 430.0±2 417.97 比 69 855.0±6 489.5,P < 0.05〕,但高于对照组。结论 在辅助 T 细胞 Th1 单向偏移 Th2 免疫抑制状态中,重症肺部感染的巨噬细胞呈 M1 偏向 M2 亚群优势活化的状态,乌司他丁则可能通过调控 M1 与 M2 亚群再平衡来发挥其抗炎效应。

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